【關(guān)鍵詞】  臭氧

　　摘  要  采用KCF-G30臭氧發(fā)生器進(jìn)行消毒，結(jié)果表明：對金黃色葡萄球菌180 min殺菌率達(dá)到90.1％，消毒后潔凈區(qū)(靜態(tài)動(dòng)態(tài))表面微生物的活菌數(shù)及沉降菌菌落較消毒前有大幅度的下降，大大低于相應(yīng)潔凈的限度。 

　　關(guān)鍵詞  臭氧；滅菌；空氣消毒 

　　臭氧具有殺菌力強(qiáng)，不產(chǎn)生殘余分子污染的性能［1］，其殺菌過程為強(qiáng)氧化作用，使微生物細(xì)胞中的多種成分產(chǎn)生反應(yīng)，從而產(chǎn)生不可逆轉(zhuǎn)的變化而死亡 ［2］。本文用KCF-G30臭氧發(fā)生器進(jìn)行消毒，利用HVAC系統(tǒng)的循環(huán)風(fēng)作為臭氧的載體。臭氧發(fā)生器安裝在空調(diào)機(jī)組中，消毒時(shí)，先啟動(dòng)消毒程序，臭氧發(fā)生器自動(dòng)開啟，產(chǎn)生的臭氧通過HVAC系統(tǒng)的循環(huán)風(fēng)送到潔凈區(qū)的各房間中，使空氣中的臭氧濃度分布均勻，從而達(dá)到消毒滅菌的目的，使?jié)崈魠^(qū)生產(chǎn)的外用液體制劑達(dá)到GMP要求的相應(yīng)，并對臭氧的滅菌效果進(jìn)行測試。 

　　1  儀器與材料 

　　1.1  儀器  KCF-G30臭氧發(fā)生器2臺（康爾公司），G-1型真空式手動(dòng)采樣器，潔凈車間的容積為 ： 1050 m3，室內(nèi)溫度25 ℃，相對濕度60%。

　　1.2  菌種   

　　金黃色葡萄球菌。 

　　1.3  主要試劑  

　　生理鹽水，生物指示劑。 

　　2  方法與結(jié)果 

　　2.1  臭氧消毒試驗(yàn)

　　2．1．1  培養(yǎng)基平皿的制備 

　　將Φ90 mm×15 mm的培養(yǎng)皿置于160 ℃干熱滅菌120 min，將滅菌后培養(yǎng)基加熱熔化，冷至45 ℃。 在無菌操作要求下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15 mL。待營養(yǎng)瓊脂凝固后，將培養(yǎng)基平皿倒置于30~35 ℃恒溫箱中培養(yǎng)48 h，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用(制備好的培養(yǎng)基平皿可在2~8 ℃的環(huán)境中存放2周)。 

　　2．1．2  生物指示劑的制備 

　　從金黃色葡萄球菌第四至第十四代的斜面,挑取菌苔制備菌液。臨用前將菌液作適當(dāng)稀釋后，移種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的平板中,并使之在培養(yǎng)基表面均勻分布。 

　　2．1．3   測試方法 

　　選取關(guān)鍵房間(配液間、灌裝間)用菌液培養(yǎng)皿采樣，臭氧發(fā)生器開啟的同時(shí)打開注有菌液的培養(yǎng)皿上蓋，每隔1 h分別取回2個(gè)預(yù)先放置菌液的培養(yǎng)皿，連續(xù)監(jiān)測5 h。 把培養(yǎng)皿放入30~35 ℃恒溫箱中培養(yǎng)48 h，進(jìn)行菌落計(jì)算。重復(fù)以上操作5次，取平均值計(jì)算。 

　　2．1．4  以未經(jīng)臭氧處理的培養(yǎng)皿做空白對照。 

　　2．1．5  臭氧發(fā)生器在不同的工作時(shí)間內(nèi)的殺菌效率以殺菌率(%)表示，見表1。表1  臭氧發(fā)生器在不同的工作時(shí)間內(nèi)的殺菌率(%) 

　　2．2  消毒后對空間沉降菌的測試效果比較 

　　消毒前使靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在十萬的規(guī)定值，在室內(nèi)溫度23 ℃，相對濕度60%。 測試人員必須穿戴符合環(huán)境的工作服，靜態(tài)測試時(shí)室內(nèi)測試人員不得多于2人。在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30 min后開始測試。采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)30 min時(shí)間，在30~35 ℃條件下讓其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計(jì)算，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)。在室內(nèi)溫度 25 ℃，相對濕度62%，開啟臭氧發(fā)生器180 min后，臭氧濃度達(dá)到10.0 mL/m3。選取關(guān)鍵房間(配液間、灌裝間)用菌液培養(yǎng)皿采樣，重復(fù)以上操作5次，計(jì)算平均值。消毒前后對空間沉降菌的測試效果比較見表2。 
由表2可見，潔凈區(qū)經(jīng)臭氧消毒后，潔凈廠房空間沉降菌動(dòng)態(tài)測試大大低于潔凈區(qū)所要求的限度，達(dá)到十萬級潔凈要求。 

　　2．3  表面微生物的測試 

　　在室內(nèi)溫度 23 ℃，相對濕度60%，開啟臭氧發(fā)生器180 min后，臭氧濃度達(dá)到10.0 mL/m3。選取關(guān)鍵房間(配液間、灌裝間)，分別在設(shè)備、操作臺、墻壁、地面等的開放表面與死角、縫隙處取樣，取樣面積：25 cm2，用事先經(jīng)無菌水或緩沖液濕潤的無菌紗布或脫脂棉充分擦拭。將取樣后的棉簽放入滅菌帶塞三角瓶生理鹽水中，振搖，按微生物檢查法進(jìn)行檢測，同時(shí)做陽性和空白對照。重復(fù)以上操作5次，計(jì)算平均值。消毒前后潔凈區(qū)表面微生物的測試效果比較見表3。表2  消毒前后對空間沉降菌的測試效果比較（略）表3  臭氧消毒前后潔凈區(qū)表面微生物的測試效果比較（略）

　　由表3可見，潔凈區(qū)經(jīng)臭氧消毒后，潔凈廠房空間表面微生物動(dòng)態(tài)測試大大低于潔凈區(qū)所要求的限度，達(dá)到十萬級潔凈要求。 

　　2．4  臭氧濃度測試 

　　將檢測管的兩端封口在采樣器前端切割孔中折斷，然后再把檢測管插在采樣器的進(jìn)氣口上，對準(zhǔn)所測氣體，轉(zhuǎn)動(dòng)采樣器手柄，使手柄上的紅點(diǎn)與采樣器后端蓋上的紅線相對。拎開手柄到所需位置固定。3 min后，當(dāng)檢測管變色的前端不再往前移動(dòng)時(shí)，取下檢測管，從檢測管上即可讀出所測氣體的濃度。 

　　2．4．1  臭氧濃度-時(shí)間分布測試 

　　以臭氧發(fā)生器開啟60 min后，選取送風(fēng)管zui末端且風(fēng)量較少的房間進(jìn)行(脫外衣間)，室內(nèi)溫度25 ℃，相對濕度60%。用G-1型真空式手動(dòng)采樣器采樣，共取5個(gè)采樣點(diǎn)，每一采樣點(diǎn)應(yīng)同時(shí)采兩個(gè)平行樣，交叉重復(fù)以上操作3次，計(jì)算平均值，結(jié)果見表4。表4  臭氧濃度-時(shí)間分布測試（略）

　　由表4可見，臭氧發(fā)生器開啟60 min，臭氧濃度達(dá)到5 mL/m3，并一直上升至關(guān)機(jī)前，關(guān)閉臭氧發(fā)生器90 min，臭氧濃度降到零，達(dá)到安全標(biāo)準(zhǔn)。 

　　2．4．2  臭氧濃度-空間分布測試 

　　選取關(guān)鍵房間(配液間、灌裝間),用G-1型真空式手動(dòng)采樣器，室溫25 ℃，相濕度60%，臭氧發(fā)生器開啟60 min后采樣，共取5個(gè)點(diǎn)，每一采樣點(diǎn)應(yīng)同時(shí)采兩個(gè)平行樣，交叉重復(fù)以上操作3次，計(jì)算平均值，結(jié)果見表5。表5  臭氧濃度-空間分布測試 

　　由表5可見，臭氧濃度-空間分布測試結(jié)果表明臭氧濃度分布均勻。 

　　3  討論 

　　臭氧(O3)是氧的同素異形體，由3個(gè)氧原子組成。常溫常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，很快自行分解成氧氣(O2)和單個(gè)氧原子(O)。氧原子具有很強(qiáng)的活性，對細(xì)菌、病毒等微生物有強(qiáng)的氧化作用，臭氧氧化分解了細(xì)菌內(nèi)部氧化葡萄糖所必需的酶，破壞其細(xì)胞膜，導(dǎo)致新陳代謝障礙并抑制其生長，再繼續(xù)滲透破壞其細(xì)胞膜［3］，將其殺死，多余的氧原子則會自行重新結(jié)合成為普通的氧分子。本試驗(yàn)證明，KCF-G30臭氧發(fā)生器對金黃色葡萄球菌180 min時(shí)殺菌率達(dá)到90.1％，240 min殺菌率達(dá)到92.1%。由表1我們可進(jìn)一步看出，臭氧的濃度是隨時(shí)間的增加而增強(qiáng)(開機(jī)時(shí)間越長臭氧濃度越高)，同時(shí)還證明消毒后潔凈區(qū)(靜態(tài)動(dòng)態(tài))表面微生物測試的活菌數(shù)應(yīng)較消毒前有大幅度的下降，大大低于相應(yīng)潔凈的限度。此外還證明在臭氧發(fā)生器開啟60 min后所有潔凈室臭氧濃度達(dá)到5 mL/m3。由于甲醛熏蒸滅菌不安全，人工紫外滅菌效果又受物體阻擋及照射距離影響，臭氧則不受此影響，且臭氧具有消毒后可逐漸分解為氧，對人體無害，并能自行消除等優(yōu)點(diǎn)，因此可以廣泛用于生產(chǎn)車間的潔凈消毒［4］。